SENSIBILISATION CUTANEE CHEZ LA SOURIS: Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques: Méthode BrdU

OCDE 442B

Principe de l’essai OCDE 442B

L’Essai de stimulation locale des ganglions lymphatiques BrdU-ELISA est une variante non radioactive de la méthode LLNA qui vise à identifier les substances chimiques sensibilisantes et à mesurer la prolifération lymphocytaire qu’ils induisent dans les ganglions lymphatiques auriculaires.

Cette méthode décrite chez la souris (de souche CBA) se base sur la quantification de la 5-bromo-2- désoxyuridine (BrdU), un analogue of thymidine, dans l’ADN des lymphocytes, comme indicateur de cette prolifération. Quatre animaux au minimum sont employés par groupe de dose, avec au minimum trois concentrations de la substance d’essai, plus un groupe contrôle négatif traité avec le véhicule seul, et un contrôle positif, au besoin. Le protocole expérimental dure 6 jours. Ensuite, les animaux sont euthanasiés et une suspension cellulaire de cellules de ganglions lymphatiques (CGL) est préparée. La procédure de dispersion des CGL est une étape cruciale, en particulier pour les ganglions lymphocytaires très petits chez le animaux du groupe contrôle négatif. Ensuite la quantification de l’incorporation du BrdU dans l’ADN des lymphocytes est réalisée à l’aide d’un kit de dosage ELISA. L’essai inclut des mesures (pesée, BrdU) et des observations cliniques quotidiennes.

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